三疣梭子蟹HMGR基因的克隆及其在蜕皮中的表达分析

为了研究3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase, HMGR)在甲壳动物蜕皮调控中的作用, 采用RT-PCR和cDNA 末端快速扩增技术(RACE), 克隆得到三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) HMGR基因的cDNA序列(GenBank登录号: KF280756)。该序列全长2575bp, 包括一个53bp的5′端非编码区, 一个686bp的3′端非编码区和一个长度为1836bp的开放阅读框, 编码611个氨基酸。该氨基酸序列与已公布的美洲海鳌虾HMGR氨基酸序列相比一致性达65%, 具有Ⅰ型HMGR保守催化区域、两个HMG-CoA结合基序和两个NADP(H)结合基序。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术, 分析三疣梭子蟹HMGR基因的组织差异表达及在蜕皮周期中的表达水平变化, 结果表明HMGR基因在三疣梭子蟹大颚器(MO)中的表达量最高, 在其它组织中表达量均极低; 在三疣梭子蟹蜕皮周期中, 大颚器中HMGR基因的表达量自A期至D0亚期升至最高, 然后下降, 至D4亚期最低。验证了大颚器是三疣梭子蟹合成甲基法尼酯的唯一器官, 表明HMGR在三疣梭子蟹蜕皮调控中起着重要作用。