环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测扁浒苔(Ulva compressa)的研究

本研究将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)与横向流动试纸条(lateral flow dipstick, LFD)的可视化检测方法结合, 建立了扁浒苔(Ulva compressa)的LAMP-LFD快速检测技术。该方法以扁浒苔的内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)序列为检测靶标, 设计了3对特异性引物(其中, 上游内引物由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素标记的探针。结果表明, LAMP最适反应温度为63℃, 扩增时间为60 min, 从核酸扩增到LFD结果判读需70 min。利用LAMP-LFD可特异性检出扁浒苔, 对浒苔、曲浒苔、缘管浒苔和孔石莼等石莼属绿藻以及塔玛亚历山大藻、无纹环沟藻、东海原甲藻、锥状斯克里普藻和赤潮异弯藻等常见微藻的检测结果为阴性。该方法最低可检测到0.1 pg的扁浒苔基因组DNA, 是以UcoITS-F3和UcoITS-B3为特异性引物的PCR方法的100倍。对实际样品的检测结果表明, LAMP-LFD方法检测扁浒苔与传统的形态学观察的结果一致。因此, 该方法可快速、特异地检测出扁浒苔, 而且操作简单, 仪器设备依赖性低, 有潜力成为扁浒苔现场检测的常规技术手段。