枇杷核醇腈酶的高效分离纯化及酶学性质研究

以枇杷"解放钟"的核为原料,根据醇腈酶高耐热性的特点,采用60℃热处理-DEAE-Sepharose FF柱分离组合技术,从枇杷核中获得电泳纯的醇腈酶.最终纯化酶的比活力达到232 U.mg-1,酶活力回收率高达64%.所制备的的R型醇腈酶具有高度的光学选择性,催化苯甲醛与丙酮氰醇反应产生R型扁桃腈,对映体过量值达到97.2%.酶学性质研究表明:该酶为单聚体,分子量约63kDa;最适反应温度40℃,最适反应pH为5.0;在本实验条件(30℃、pH5.0)下,Km为0.55 mmol.L-1,Vmax 0.80 mmol.L-1.min-1.该酶具有良好的热稳定性,60℃预处理3 h,酶活力保持不变,70℃预处理3 h,酶保留活力仍达到75%.