黄萎病菌诱导下陆地棉抗病品种SSH文库的构建

采用抑制差减杂交技术，构建了陆地棉抗病品种冀棉20经黄萎病菌诱导8h、12h、24h、48h后的混合SSH文库，文库共包含800个阳性克隆。对质粒的酶切和巢式PCR结果表明，插入片段大小平均为400bp。随机挑选20个阳性克隆进行测序，利用BLASTn和BLASTx进行序列相似性分析，发现20条EST都可以找到功能已知的同源序列，其中在BLASTn比较结果中，功能已知的有12条，占全部EST的60%；BLASTx的比较结果中有14条功能已知，占全部EST的70%。这些同源序列涉及到10种与抗病防御相关的基因，包括丝氨酸/苏氨酸激酶、谷胱甘肽-S-转移酶、乙醇脱氢酶、细胞色素P450、ACC氧化酶等。将这些序列与GenBankdbEST库进行比对，发现75%的EST都可以找到同源性较高的序列，它们都来自于植物在生物与非生物胁迫条件下特异表达的cDNA文库，这些胁迫包括病原菌诱导、低温处理、紫外线照射、热激处理、盐处理、氧胁迫、水杨酸诱导等。