王百合单染色体DNA文库的构建

以王百合为模式植物建立了简单快速分离植物单染色体及扩增和克隆其DNA的方法,即显微操作分离单个染色体并放入Eppendorf管中,经Sau3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau3A寡核苷酸人工接头,然后以寡核苷酸人工接头中的一条链为引物进行两轮PCR扩增.PCR产物为300～2500bp,多数为1000bp左右,经Southern杂交证实PCR产物来自王百合基因组DNA.对单染色体第二轮PCR产物进行克隆,构建单染色体DNA文库,得到约100000个重组子.对其中84个重组子进行分析,插入片段为300～1800bp,平均为780bp.与以往方法相比,此方法避免了在纳升体积内酶解、连接等操作,扩增底物只需一条染色体而不是以往的几十条,而且克隆片段(平均780bp)大于以往的报道(平均650bp).