用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究

用我们所克隆的促红细胞生成素(EPO)基因组基因,构建了表达载体pRSV/EPO.用脂质体法转染CHOK12细胞,在400μg/mL的G418浓度下筛选到了稳定表达EPO的细胞株,表达量约为每天每106细胞160IU.在此基础上又构建了带有潮霉素B抗性的二氢叶酸还原酶(dhfr)基因表达载体pHY/dhfr,再将这一表达载体用脂质体方法导入C10细胞中,经200μg/mL的潮霉素B筛选,获得了部分潮霉素B抗性的细胞株,这些细胞株既能表达EPO又能表达外源的dhfr基因,经1μmol的氨甲喋呤(MTX)加压筛选,获得了表达量为每天每106细胞2400IU的高表达细胞克隆,表达量提高了10～15倍.初步建立了用非dhfr缺陷型细胞高效表达外源基因的方法,这一方法在生产上有实际意义,在理论上值得进一步研究.用TF-1细胞对EPO进行了生物活性检测,证实所表达的EPO有生物活性