新型杆状病毒穿梭载体及绿色荧光蛋白在棉铃虫中的表达

利用棉铃虫核型多角体病毒的全基因组DNA构建转座_穿梭载体Hanpvid,它既能在大肠杆菌中以质粒的形式复制,又能在棉铃虫细胞中复制形成感染性病毒粒子.Hanpvid携带转座_穿梭盒,包括原核复制子miniF,卡那霉素抗性基因Kan,LacZα和Tn7转座子的接受位点attTn7.另一供体质粒以转座的方式将绿色荧光蛋白基因(gfp)和经亚克隆的多角体蛋白基因(ocu)整合到Hanpvid的attTn7位点上成为重组病毒rHa_FaGP.Southernblotting证实重组病毒的构建是正确的,SDS_PAGE证明gfp和ocu在棉铃虫细胞中高效表达.以重组病毒感染3龄幼虫,4d后,能看到大量发绿色荧光的血淋巴细胞,6d后,在自然光下即可见发绿色荧光的棉铃虫幼虫.