大豆中NBS类抗病基因同源序列的分离与鉴定

植物抗病基因的克隆研究对于植物抗病育种和抗病机制的理解具有重要意义.根据预测结构域可将已知植物抗病基因分为4类,其中以NBS(nucleotidebindingsite)结构域为主.NBS结构域包括P环(激酶1a)、激酶2a和激酶3a.这为利用同源技术克隆植物抗病基因提供了可能.根据烟草抗花叶病毒N基因和拟南芥抗丁香假单孢杆菌RPS2基因设计兼并引物,从大豆抗花叶病毒品种科丰1号的基因组中扩增获得358个克隆,鉴定出4个通读的且与抗病基因NBS结构域同源的片段KNBS1,KNBS2,KNBS3和KNBS4.Southern杂交表明NBS类抗病基因在大豆中为多拷贝家族;RFLP分析将KNBS4定位于F连锁群,而KNBS2则与大豆抗花叶病毒基因Rsa的SCAR标记同位于J连锁群.Northern分析表明KNBS2类在大豆的根、茎和叶中为低丰度组成型表达,这为最终克隆大豆抗病基因打下了基础.