细胞色素c氧化酶可溶性CuA结构域的表达、分离纯化和初步表征

细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ含有可溶性双核铜中心CuA结构域蛋白.报道了Paracoccusversutus菌CuA结构域的基因克隆、表达和分离纯化及其初步表征.编码CuA结构域的基因插入pET11d质粒载体中,于E.coliBL21(DE3)中进行表达.结果表明,CuA结构域蛋白在这个表达体系中主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总蛋白的10%左右.经尿素溶解,Cu+/Cu2+重组复性,Q-Sepharose快速阴离子交换柱和Sephadex-G75凝胶过滤柱纯化,得到了电泳纯的紫红色可溶性蛋白.紫外-可见吸收光谱在478nm有较强吸收峰,530nm处有一肩峰,在360和806nm处有弱吸收峰,它们可归属为混价双金属核中心(Cu2S2R2)中Cu-S和Cu-Cu间的电荷转移与轨道相互作用.圆二色谱表明其二级结构主要为β-折叠形式.荧光激发谱最大波长为280nm,发射谱最大波长为345nm.