水稻5SrDNA和着丝粒顺序RCS2拷贝数的Fiber-FISH测定

用伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术测定了5SrDNA和着丝粒DNA顺序RCS2在水稻广陆矮四号(OryzasativasspindicacvGuangluaiNo4)基因组中的拷贝数.为了确定拷贝数,需要知道显微镜下一定长度DNA纤维所含碱基对数.为此,测量了两个已知碱基对数DNA序列的伸展纤维在显微镜下的长度.其中供试BAC38D17的插入序列为136kb,其伸展纤维在显微镜下的长度为56.4μm,平均为2.41kb/μm;BAC44B4全长为144.5kb,其伸展纤维的长度为55.7μm,平均为2.60kb/μm.这与Watson-Crick模型中B-DNA的2.97kb/μm十分接近.根据两个样本每微米平均碱基数,即2.51kb/μm的标准,计算出5SrDNA的拷贝数约为686,着丝粒DNA顺序RCS2约为286～1121拷贝.