拟南芥钙调素结合蛋白激酶的克隆和特性分析

通过筛选拟南芥cDNA文库结合RACE的方法,克隆了一个全长cDNA——AtCBK1.Northern杂交和mRNA原位分析表明该基因在生长旺盛的部位和维管组织中大量表达.利用昆虫细胞表达系统,表达并纯化了重组蛋白AtCBK1,钙调素结合实验和自磷酸化、底物磷酸化分析直接证明了其酶活性受钙/钙调素调控,毛细管电泳检测其自磷酸化氨基酸为苏氨酸.系统进化分析推测AtCBK1可能来源于一个古老的CRK,与动物的CaMK在进化上可能来自不同的祖先.结果充分说明AtCBK1编码一个拟南芥中全新类型的钙调素结合的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.