κ改造的腺病毒5型E1A基因对TNF-α诱导的猪血管内皮细胞中NF-κB活性的抑制作用

在延缓性免疫排斥反应(DXR)过程中,NF-κB发挥着关键作用.如何恰到好处地抑制其活性是本领域研究的重要问题之一.用改造的E1A基因(E1AΔ)包括功能区(1~80氨基酸)和核定位区(139~243氨基酸),删除其中可能对人体有害的CR2区,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,并转染猪血管内皮细胞(PAEC),经G418筛选,获得稳定表达细胞株.RT-PCR技术和细胞生长曲线分析,证明E1AΔ基因能在PAEC中稳定表达,且不影响细胞的正常生长,并能抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的细胞凋亡.报告基因分析表明,E1AΔ能抑制由TNF-α诱导的NF-κB活性,其抑制率为53%,对NF-κB信号转导途径下游的一个重要炎症基因——E-选择素基因的表达抑制率达63%.综上,E1AΔ基因的这些功能基本符合异种器官移植中克服DXR的要求,为利用E1AΔ基因克服DXR的可行性提供了实验依据.