重组慢病毒介导的人凝血因子ⅨcDNA在培养细胞和血友病B小鼠中的表达

为探索慢病毒载体介导的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)cDNA在培养细胞中的表达水平,及重组慢病毒应用于血友病B基因治疗的可行性,分别构建由肝特异性启动子ABP调控的hFⅨ的慢病毒载体FAXW,以及由泛肽-C调控的hFⅨ慢病毒载体FUXW;用磷酸钙法,将慢病毒载体与包装质粒CMVΔR8.2和包膜质粒VSV-G共转染产毒细胞293T,以制备重组慢病毒.重组FUXW病毒分别感染293T,BHK和L-02细胞,经检测皆有hFⅨ蛋白表达.重组FAXW病毒感染细胞48h后,仅在L-02细胞检测到hFⅨ高表达(630ng/106细胞),而在其他感染细胞中hFⅨ表达较低.将重组FAXW病毒经尾静脉途径注射入血友病B小鼠体内,小鼠血浆中可检测到接近治疗水平的hFⅨ抗原(45ng/mL),且持续时间超过60d.上述结果表明,慢病毒载体介导的基因转移为血友病B基因治疗提供了极有潜力的方法.