核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响

用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆,成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠.为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响,用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验,采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植,并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化,对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究.结果显示,利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚,但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%,54.2%)显著低于后者(76.9%).10mmol/L氯化锶处理6h活化效果最好.融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后,囊胚发育率(9.5%,8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%),而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段.用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%).注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植,都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠,发育到期率分别为2.5%和1.4%.结果表明,两种核移植方法对B6D2F1小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响,用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠;不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响,在上述4种激活方式中,氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.