拟南芥动蛋白基因AtKP1的克隆、表达及生物化学特性分析

动蛋白(kinesin)种类很多,在真核细胞中行使多种功能.利用3′-RACE技术从拟南芥中克隆了动蛋白-14B亚家族中的一个成员,命名为AtKP1(拟南芥动蛋白1).其最大可读框为3.3kb,编码1087个氨基酸.结构域分析表明,AtKP1多肽链中部有一个马达结构域,氨基端有一个CH结构域,羧基端一个含有202个氨基酸残基的序列表现出很强的特异性.Northern印迹表明,AtKP1基因在各种器官中广泛表达,但在幼苗中表达量最大.将克隆的长度为2808bp的AtKP1启动子区域与GUS基因进行了融合,转基因分析显示,AtKP1主要在幼嫩器官维管束和幼叶表皮毛中表达,表明AtKP1可能参与了维管束和叶表皮毛的分化或发育.对AtKP1的马达结构域进行了原核表达和亲和纯化,生物化学特性研究表明这个马达结构域可以核苷酸依赖的方式与微管结合,且具有微管激活的ATP酶活性.