基于BAC同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog基因报告体系

Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞(ES细胞)中特异表达,并在保持ES细胞多能性的机制中有重要作用的转录因子.Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调,使之成为指示ES细胞多能性最理想的标志基因之一.本研究基于细菌人工染色体(bacterialartificialchromosome,BAC)同源重组技术,并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案,高效构建了小鼠ES细胞(mES细胞)的Nanog/EGFP报告体系.基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性,并能稳定地将Nanog与EGFP(enhancedgreenfluorescenceprotein)的表达偶联.此报告体系能通过EGFP的表达有效报告Nanog基因的表达水平,从而对mES细胞分化或未分化状态作出明显指示.本研究为mES细胞自我更新和分化的研究提供了一个理想的实验体系,不仅能用于进一步优化mES细胞的培养体系,对研究Nanog的表达调控及其与其他维持mES细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.