人胚胎干细胞体外诱导分化为肝脏细胞

建立诱导人胚胎干细胞分化为肝细胞的方法,为细胞移植与生物人工肝等肝病替代治疗提供新的种子细胞来源.将人胚胎干细胞在细菌培养皿中悬浮培养7d,形成囊性拟胚体,接种至包被有Ⅰ型胶原的组织培养皿,以含有地塞米松、胰岛素的条件培养液进行诱导,通过光学显微镜和电子显微镜观察细胞的形态变化;免疫细胞化学和RT-PCR检测细胞诱导前后肝细胞特异性基因的表达;用靛青绿摄取、排泌实验、糖原染色实验及白蛋白、尿素分泌检测肝细胞的相关功能.条件诱导液培养14d,细胞形态由圆形变为多角形和长梭形,出现双核或多核,表面有微绒毛,胞浆内含丰富的线粒体、内质网、溶酶体及糖原颗粒等;这些细胞表达幼稚或成熟肝细胞特异性的AFP,ALB,CK18,CK19和CYP1B1等基因,并具有靛青绿摄取、排泌、贮存糖原和分泌白蛋白、氨基代谢生成尿素等功能.形态、表型及功能的实验结果均证实人胚胎干细胞经上述方法培养可以向肝细胞分化.