拟南芥磷酸肌醇特异性磷脂酶AtPLC6基因的克隆与表达

利用文库筛选和RT-PCR方法,从拟南芥中克隆到长度为1954bp,包括全长1734bp编码区的AtPLC6cDNA,推测其编码一含有578个氨基酸的多肽,其等电点为7.24,分子量为66251.84Da.在GenBank中进行序列比对发现,AtPLC6为一新发现的拟南芥PI-PLC基因.对推测的氨基酸序列结构的分析表明,AtPLC6具有EF手性结构、X结构域、Y结构域和C2结构域,与植物中已知的其他磷酸肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在结构上相似,类似于动物中典型的δ-型磷酸肌醇特异性磷脂酶.将AtPLC6的编码区序列插入原核表达载体后进行了原核表达,纯化的AtPLC6重组蛋白可水解PIP2产生IP3和DAG,且水解活性呈明显的钙依赖特性,反应的最适Ca2+浓度为10μmol/L.Northern分析结果表明,在检测的根、茎、叶、花、果和幼苗中均有AtPLC6mRNA的转录,但转录水平较低.用ABA,NaCl,冷和热等胁迫处理的实验表明,AtPLC6mRNA的转录受到冷胁迫的诱导,而受ABA,NaCl和热等胁迫影响较小,推测AtPLC6可能参与了植株对冷胁迫的响应.