一种新的有机磷降解酶基因ophc2的克隆与表达

将来源于假产碱假单胞菌(Pseudomonaspseudoalcaligenes)的有机磷降解酶OPHC2进行了N端及内肽的氨基酸序列测定,根据得到的氨基酸序列设计合成了简并引物,通过PCR和反向PCR从Pseudomonaspseudoalcaligenes中克隆出有机磷降解酶基因ophc2.编码基因全长975bp,(G+C)含量为63%,有一个可读框,编码324个氨基酸,酶蛋白理论分子量为36kD.编码基因的核苷酸序列分析表明,与目前发表的有机磷降解酶基因相比同源性很低,最高的只有46.4%,说明这是一个新的有机磷降解酶基因.将克隆得到的带有信号肽编码序列的和不带信号肽编码序列的有机磷降解酶基因,分别与载体pET-30a构建重组表达质粒,得到的表达产物具有正常的生物学活性.