农杆菌介导法获得转pac1基因小麦并表现对大麦黄矮病毒的抗性

自裂殖酵母中克隆得到pac1基因,与GenBank中相关的核苷酸序列有99.3%的相似性.编码蛋白质序列分析表明,其具有RNaseⅢ结构域和双链RNA结合结构域.体外活性测定表明,以pET-5a系统在大肠杆菌中表达的pac1产物能够降解dsRNA.将pac1导入双元载体pBI121,以培养7~10d的小麦幼胚为受体材料,利用农杆菌株LBA4404对小麦品种陇鉴127进行转化,获得了41株G418抗性植株,经点杂交(dotblot)、RT-PCR和nptⅡELISA检测证实,其中25株整合有外源基因并能正常表达.对这25株转基因小麦进行大麦黄矮病毒的抗性鉴定表明,有12株表现低度抗性,表现为低接毒量时无症状,接毒量提高时发病且严重;有12株表现中度抗性,表现为低接毒量时无症状,接毒量提高时局部有不严重症状;有1株表现高度抗性,两种情况下均无症状.抗性实验结果表明了pac1介导的抗性具有剂量效应的特点.