人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响

用凝胶迁移率改变实验(EMSA)研究了人δ珠蛋白基因启动子区-64C→T点突变对DNA结合蛋白的影响.人工合成两条36bp该基因启动子区-83～-48bp之间的片段WOG和MOG,WOG含有野生型“CAAT样盒”(CCAAC),MOG含有变异型“CAAT样盒”(CCAAT,-64C→T).结果表明(1)在红系细胞MEL,k562以及经Hemin诱导的k562细胞中,MOG对CCAAT结合蛋白(CFB)和GATA1的亲和力显著增加;(2)经Hemin诱导的k562细胞中除上述两种因子外,还存在两种新的特异DNA结合蛋白C和D,前者与WOG和MOG结合,可能与k562细胞受诱导后基因表达提高有关;后者只与MOG结合,可能与-64C→T的点突变有关;(3)人胚胎发育不同阶段胎肝细胞核抽提物EMSA结果提示人胚胎发育不同阶段δ基因表达被抑制的机制可能不同.结果证明δ基因启动子缺陷的CAAT样盒是引起δ基因低水平表达的重要因素,缺陷的顺式作用元件CAAT样盒通过影响反式因子CBF及GATA1的结合影响基因的表达