人神经生长因子β亚基的基因在P.pastoris和E.coli中的表达

将hNGFB基因插入甲醇营养性酵母P.pastoris分泌表达载体pHIL-S1和E.coli表达载体pET-15b中,相应转化P.pastorisGS115(Mut+,His-)和E.coliBL21(DE3).在不含组氨酸平板上生长的酵母转化子通过PCR进一步筛选阳性克隆,P.pastoris重组菌株的蛋白电泳表明发酵液中有特异表达带,扫描分析占细胞外泌总蛋白的14.4%,Westernblotting证实该分泌蛋白具有hNGF的免疫活性.E.coli重组菌株在IPTG的诱导下表达融合蛋白.电泳扫描分析表达的融合蛋白占细胞总蛋白量的10.3%,Westernblotting检测表明具有免疫活性.