毛囊蠕形螨与皮脂蠕形螨基因组DNA的RAPD分析和序列比对

【目的】分析毛囊蠕形螨Demodexfolliculorum（D.f.）和皮脂蠕形螨D.brevis（D.b.）基因组DNA的多态性,对相关条带进行测序分析。【方法】采用改良小昆虫DNA提取法提取两种人体蠕形螨基因组DNA,选择RAPD技术对其进行多态性分析,将相关条带分别与pMD18-T载体连接,克隆、测序后进行酶切鉴定和分析。【结果】毛囊蠕形螨共扩增15条带,皮脂蠕形螨共扩增12条带；两种蠕形螨既有共有条带,又有特异性条带；根据条带差异计算得到两种间的遗传距离为0.5556.毛囊蠕形螨约800bp处特异性条带测序结果显示,序列片段长度为855bp（GenBank登录号为FI277970）；特异性引物扩增和酶切鉴定均为毛囊蠕形螨所特有.序列比对显示与阿糖胞苷DNA区域结合蛋白有46%的序列相似度。两种人体蠕形螨约300bp处共有条带序列分析显示,碱基序列均为341bp（GenBank登录号分别为D.f.FI520176；D.b.FI520175）,在第84和第165位点有2个碱基不同,分别是A/G和C/T互换,同源性高达99.4%.但未发现有开放阅读框和相似度高的序列。【结论】序列片段为855bp的特异性条带为毛囊蠕形螨所特有；341bp碱基序列为毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨所共有,同源性高达99.4%.RAPD技术可用于两种人体蠕形螨基因组DNA的多态性分析和物种鉴定。