小菜蛾糖基转移酶基因的克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达

根据秀丽小杆线虫Caenorhabditiselegans及其他昆虫中糖基转移酶基因的同源序列,采用逆转录PCR（reversetranscriptionPCR,RT-PCR）和cDNA末端快速扩增PCR（rapidamplificationofcDNAendsPCR,RACE-PCR）技术从小菜蛾Plutellaxylostella4龄幼虫中肠组织中获得了3个基因的全长序列,其开放阅读框长度分别为1383bp,1230bp和1041bp,分别编码460,409和346个氨基酸,将其分别命名为Pxbre-3,Pxbre-4和Pxbre-5(GenBank登录号分别是GU321343,GU321344和GU321345)。同源序列比对发现,这些基因和线虫中相应的糖基转移酶基因具有较高相似度,且具有对糖基转移酶活性起关键作用的氨基酸保守模块,也包含类似的跨膜区。由此推测,这3个基因为小菜蛾糖基转移酶基因,参与小菜蛾鞘糖脂的合成。实时定量PCR检测结果表明,这3个基因以及Pxbre-2在小菜蛾4龄幼虫、蛹和成虫以及4龄幼虫中肠组织均有表达,在蛹和成虫阶段表达量较高。本实验结果为今后研究鞘糖脂是否参与小菜蛾对Bt毒素的抗性奠定了基础。