粘虫类钙粘蛋白基因的克隆、序列分析及时空表达

昆虫中肠膜类钙粘蛋白（cadherin-likeprotein，CLP）是苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis(Bt)毒素的重要受体之一，与Bt毒素的杀虫作用机制以及昆虫对Bt毒素的抗性等密切相关。本研究应用RT-PCR和RACE技术，克隆了迁飞性重要害虫粘虫Mythimnaseparata类钙粘蛋白基因全长cDNA序列（命名为Msclp，GenBank登录号为JF951432），全长5642bp，编码1757个氨基酸，推导的氨基酸序列具有昆虫类钙粘蛋白的特征结构，包括1个信号肽、1个前蛋白区、12个钙粘蛋白重复、1个近膜区、1个跨膜区和1个胞质区。预测的分子量和等电点分别为196.786kD和4.5。该蛋白与同科的烟夜蛾Helicoverpaassulta、烟芽夜蛾Heliothisvirescens、棉铃虫Helicoverpaarmigera及甜菜夜蛾Spodopteraexigua的类钙粘蛋白亲缘关系最近，氨基酸序列一致性分别为61.77%，61.66%，61.26%和58.14%。荧光定量RT-PCR分析表明，该类钙粘蛋白基因在不同龄期的粘虫幼虫中表达量差异极显著(P<0.01)，其中4龄幼虫相对表达量最高，但与3龄、6龄幼虫并没有显著性差异；1和2龄幼虫表达量最低；表达部位主要在粘虫中肠，在中肠以外的虫体其他部位表达量极低。这些结果对于揭示转Bt作物对非靶标、迁飞性粘虫的杀虫作用机制以及评价其潜在的对Bt毒素抗性机制等奠定了基础。