烟粉虱MED隐种铁蛋白基因克隆、不同发育阶段和吡虫啉胁迫下的表达及原核表达

昆虫铁蛋白在铁转运和贮藏、抗氧化胁迫及病菌侵染等诱导的免疫反应等过程中发挥重要作用。为探索烟粉虱Bemisiatabaci铁蛋白功能，本研究以烟粉虱MED隐种BemisiatabaciMED为研究对象，采用反转录PCR（reversetranscriptionPCR,RT-PCR）克隆铁蛋白基因，采用荧光定量PCR检测了该基因在烟粉虱不同发育时期及在吡虫啉胁迫条件下成虫体内mRNA的表达量，并利用原核表达载体pMALBtFer1对该蛋白进行体外表达和纯化。克隆获得烟粉虱铁蛋白基因的cDNA序列，并命名为BtFer1（GenBank登录号：JX865415）。该基因cDNA长度为1043bp，编码224个氨基酸残基，序列中含有铁蛋白典型的铁结合功能域，以及由19个氨基酸残基构成的信号肽。荧光定量分析显示，BtFer1在不同发育时期均有表达，以成虫和3龄若虫期的表达量较高，并且该基因的表达受吡虫啉胁迫处理的强烈诱导。体外表达、纯化和电泳检测显示，在0.3mmol/L浓度IPTG诱导下融合蛋白在上清和沉淀中均能表达，电泳检测到一条约68kD的外源蛋白，与预测融合蛋白分子量大小相符。本研究明确了该铁蛋白基因在烟粉虱MED隐种不同发育阶段及在低浓度吡虫啉胁迫下成虫体内的表达水平，为深入研究其功能提供理论依据。