棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备

【目的】c-Myc是近年来研究较多的转录因子，也是受Wnt/β-catenin信号通路调节的重要靶标。本研究旨在克隆棉铃虫Helicoverpaarmigerac-Myc基因，从核酸水平初步调查c-myc在滞育和非滞育蛹脑中的表达情况，同时制备其蛋白的多克隆抗体。【方法】通过RACE方法克隆棉铃虫c-myc基因的cDNA，运用RT-PCR方法比较滞育和非滞育蛹脑中Har-c-myc基因的表达情况。根据获取的序列构建原核表达载体，在大肠杆菌Escherichiacoli中进行表达，纯化后免疫新西兰兔，制备了多克隆抗体。【结果】克隆了棉铃虫c-myc基因，核酸水平的研究表明滞育蛹脑中c-myc表达水平明显低于非滞育蛹脑。成功地在大肠杆菌中表达了c-Myc部分肽段并通过镍柱纯化获得了较纯的重组蛋白。制备的c-Myc抗体效价达到了1:125000。【结论】滞育蛹脑中Har-c-myc的表达下调。获得了抗棉铃虫c-Myc的多克隆抗体。本研究的成果为后续进一步深入研究棉铃虫Wnt/β-catenin信号通路在棉铃虫发育中的作用奠定了基础。