基于种特异性COI标记的新入侵种甘蓝粉虱快速鉴定技术

【目的】针对粉虱类害虫种类多、体型微小、形态相似、难以准确快速识别的问题，以新入侵我国大陆的甘蓝粉虱Aleyrodesproletella(L.)为靶标，以田间常见的其他10种/隐种粉虱为参照，采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrialDNAcytochromecoxidasesubunitI,mtDNACOI)基因的种特异性(species-specificCOI,SS-COI)PCR方法，研究其快速分子检测技术。【方法】利用mtDNACOI基因通用型引物LCO-1490/HCO-2198获得甘蓝粉虱及其他常见粉虱的COI序列，根据测序结果设计种特异性SS-COI引物1对（APZYJF/APZYJR），其扩增片段大小为384bp，同时对该对引物的种特异性及灵敏性进行检测。【结果】种特异性检验结果显示，该对引物仅对甘蓝粉虱的mtDNACOI基因具有扩增效果，对我国常见的其他种类的粉虱包括温室粉虱Trialeurodesvaporariorum(Westwood)、柑橘粉虱Dialeurodescitri(Ashmead)、螺旋粉虱Aleurodicusdisperses(Russell)、双钩巢粉虱ParaleyrodespseudonaranjaeMartin、非洲伯粉虱Bemisiaafer(PriesneretHosny)以及烟粉虱B.tabaci(Gennadius)5个隐种（MED,AsiaI,AsiaII1,AsiaII3和China1）等不具有交叉反应扩增能力。灵敏性检验结果显示，该对引物不仅对不同性别的成虫具有良好的扩增效能，对2-4龄若虫甚至单粒卵或单头初孵若虫亦具有同样的扩增能力，其最低检测阈值为14.00±0.37pg/μL（相当于1/25600头雌性成虫）。【结论】该技术体系完全可用于甘蓝粉虱的快速准确识别及检测监测，对有效阻截其进一步扩张蔓延意义重大。