意蜂工蜂酸性磷酸酶的纯化及其酶学特性

从意蜂Apismellifera工蜂体内分离提纯酸性磷酸酶（ACPase,EC3.1.3.2）,并对其性质进行了研究。将工蜂酸性磷酸酶的初提物经分段盐析、DEAE-SepharoseFF离子交换层析及SephadexG-200凝胶过滤等纯化步骤，得到经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带的酶液。提纯倍数为77.24，酶液比活力为16.22U/mg（对硝基苯磷酸二钠作底物）。利用凝胶过滤法测定酶的相对分子质量为135kD，SDS-PAGE测定酶的亚基相对分子质量为63.1kD。酶的等电点为4.46和4.79。非还原/还原（NR/R）单向、双向SDS-PAGE显示酶分子含有链内二硫键。对二级结构圆二色谱分析显示，酶分子中α-螺旋占13.84%，β-折叠占25.68%，无规则卷曲占56.34%。氨基酸组成分析结果表明,酸性磷酸酶约含有507个氨基酸残基，富含门冬氨酸残基。