正交试验法确定测定意大利蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶反应的最佳条件

用正交试验法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系的pH值、反应温度和反应时间5个因素对测定意大利蜜蜂ApismelliferaligusticaSpinola头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响,并从试验组合中选出最佳条件。蜜蜂AChE活性的测定采用Gorun(1978)改进的Ellman方法,以碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)为底物,5,5'二硫双硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,测定反应物在412nm波长下的光密度值,用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量,经计算得到蜜蜂头部AChE的比活力。对正交试验结果进行极差分析和方差分析,结果表明各因素对实验结果影响的大小顺序为：温度＞pH值＞时间＞酶浓度＞底物浓度。并得出测定蜜蜂头部AChE活性的最佳条件是：酶终浓度0.2头/mL、底物终浓度0.8mmol/L、pH值7.5、温度40℃及反应时间5min。