棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达

本研究用RT-PCR方法，克隆了棉卷叶野螟Haritalodesderogata(Fabricius)泛素基因编码区，GenBank登录号为EU580145。序列分析表明，该编码区长228bp，编码76个氨基酸，推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为8.53kD和5.83。同源性比较发现，棉卷叶野螟泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有93%以上的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabricius)遗传距离较近，通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与pET-32a(+)连接，构建原核表达载体pET-32a-ub，经IPTG诱导，棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区，并经Westernblotting分析证明实现了该基因的原核表达，为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。