昆虫神经毒素BjαIT的表达及杀虫活性

根据毕赤酵母Pichiapastoris密码子偏爱性，不改变毒素蛋白质一级结构，设计合成了昆虫神经毒素BjαIT基因，并分别克隆至大肠杆菌Escherichiacoli融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。在IPTG的诱导下，神经毒素在大肠杆菌中融合表达，表达产物利用镍亲和层析柱纯化，纯化产物用于制备抗血清和活性测试。采用斑点杂交，筛选得到了较高水平分泌表达重组BjαIT的酵母转化子，摇瓶条件下，毒素表达量最大可达约20mg/L。大肠杆菌BjαIT表达产物对东亚飞蝗Locustamigratoriamanilensis和德国小蠊Blattelagermanica没有活性，但酵母表达产物经注射东亚飞蝗和德国小蠊表现出杀虫活性。