棉铃虫幼虫中肠细胞脂筏的制备及鉴定

脂筏是细胞膜上富含胆固醇、鞘脂类和糖基磷脂酰肌醇锚着蛋白的去垢剂不溶性微结构域，被认为是多种细胞膜孔毒素在细胞表面形成寡聚体的平台。为研究脂筏与Bt毒素在细胞膜上形成寡聚体膜孔的关系，本文对棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫中肠脂筏的制备与鉴定方法进行了研究。根据脂筏在低温（4℃）下不溶于去垢剂的特性，采用TritonX-100处理棉铃虫幼虫中肠刷状缘膜囊泡，溶解非脂质筏成分，以OptiPrep为介质进行密度梯度离心，分离去垢剂不溶组分，成功地得到了棉铃虫幼虫中肠上皮细胞的脂筏。再以脂筏的特有化学成分神经节苷脂GM1作为脂筏的标志分子，利用霍乱毒素β亚基能与GM1特异性结合的特性，以辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素β亚基用点印迹法化学发光检测神经节苷脂的分布，从而对脂筏进行定性鉴定。结果表明我们建立的脂筏制备方法简便、易行，比传统的蔗糖梯度离心法大大缩短了制备所需时间。