朱砂叶螨HSP90基因克隆及原核表达

采用RT-PCR及RACE技术克隆朱砂叶螨Tetranychuscinnabarinus的热激蛋白90(HSP90)基因,并进行序列分析,得到一条长2595bp的cDNA序列,该序列开放阅读框（openreadingframe,ORF）为2169bp,编码722个氨基酸,分子量约为83.45kDa,理论等电点为4.81,3′非编码区（untranslatedregion,UTR）为249bp,5′UTR为177bp。通过Antheprot分析发现5个HSP90家族的签名序列及胞质HSP90特征序列MEEVD。同源性分析表明,朱砂叶螨HSP90编码区核苷酸序列和其他已知的HSP90,尤其是节肢动物昆虫的HSP90,具有很高的相似性。将鉴定正确的原核重组表达质粒pET43a-TcHSP90,转化大肠杆菌EscherichiacoliBL21(origami)进行原核表达,应用SDS-PAGE和Westernblotting技术分离并检测融合蛋白,结果表明构建的原核表达质粒可以在宿主菌中稳定、正确表达。朱砂叶螨TcHSP90基因的克隆、原核表达,为进一步研究HSP90的性质和功能的研究提供有用的实验材料。