熊蜂ISSR-PCR体系的建立与优化及其在亲缘关系分析中的应用

以小峰熊蜂BombushypocritaPérez为实验材料,建立并优化简单序列重复区间(inter-simplesequencerepeat,ISSR)扩增多态反应体系,并运用ISSR标记和NTSYS聚类软件分析群内亲缘关系和亚家系组成。结果表明:在10μL的PCR反应体系中各组分的适宜终浓度为1×PCR缓冲液、0.3mmol/L反应底物、1.25μmol/L引物、3mmol/L镁离子、2.5UTaq酶和8.18~23.76μg/mLDNA模板。用此优化后的反应体系对小峰熊蜂基因组DNA进行ISSR-PCR扩增,能有效分析群内亲缘关系和亚家系组成。