Cry1Ac基因载体构建及其在枯草芽孢杆菌中的杀虫活性表达

根据苏云金芽孢杆菌BacillusthuringiensisHD-73基因Cry1Ac和枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis木糖诱导型启动子PxylR序列,分别设计2对特异引物Cry1AcF/R和PxyF/R，扩增获得了完整的启动子PxylR和Cry1Ac基因序列，进一步以上述产物混合物为模板，以PxyF/Cry1AcR作引物进行重迭PCR，获得了载体PxylR-Cry1Ac，经SphⅠ和BamHⅠ完全酶切后，将PxylR-Cry1Ac插入大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315，重组表达质粒pCry1Ac315转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。工程菌株质粒酶切电泳分析、SDS-PAGE电泳分析和杀虫生物活性测定结果证实了Cry1Ac基因的导入及其在枯草芽孢杆菌JAAS01D中的有效表达。