家蚕30kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定

以Coca's提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyxmori的粗浸液，利用SDS-PAGE和Westernblotting鉴定其特异性变应原，然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30kD的特异性变应原，再经MALDI-TOF在线联机分析，所得质谱数据进入网站搜索分析。结果显示：1～5龄家蚕均有20条左右蛋白带，其中5龄家蚕有23条蛋白带，主带有11条（82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18kD）。选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹，1～4龄家蚕均显示出82和79kD的特异性变应原；但只有5龄家蚕的30kD蛋白为特异性变应原，通过离子交换层析和经切胶纯化出30kD蛋白，再经MALDI-TOF-MS鉴定该蛋白为外膜蛋白。提示家蚕不同时期抗原成分有所变化，5龄家蚕新出现的30kD蛋白为特异性变应原。