棉铃虫性染色体两种分子标记的克隆及序列分析

为了建立棉铃虫Helicoverpaarmigera性染色体的特异性分子标记，利用RAPD-PCR技术对雌雄棉铃虫基因组DNA进行筛选，从500种随机引物中筛选到1条引物（Operon编号为AF-18），可扩增出1条约450bp的雌性特异片段。经克隆测序并合成特异引物进行验证，表明该片段为棉铃虫雌性特异分子标记，位于W染色体上。利用家蚕、果蝇等昆虫Kettin基因序列，克隆了棉铃虫的同源基因HaKettin片段，并采用荧光定量PCR技术，以棉铃虫的DH-PBAN基因为参照基因，检测棉铃虫雌雄不同个体间HaKettin基因与DH-PBAN基因的拷贝数之比，结果表明：雄体HaKettin∶DH-PBAN=1.0，雌体HaKettin∶DH-PBAN=0.5，据此推断HaKettin基因位于棉铃虫Z染色体上。