青杨脊虎天牛CYP4G2基因片段的克隆、序列分析与表达

根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物，利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechusrusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段，构建原核表达载体pET-CYP4G2，将其转化入大肠杆菌EscherichiacoliJM109中表达。序列分析结果表明，该基因(CYP4G2，GenBank登录号为EF429250)保守区域阅读框全长387bp，编码129个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为16.9kD和5.75；推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氨基酸序列一致性较高（63%～86%），且具有细胞色素氧化酶的典型特征。IPTG诱导后，SDS-PAGE电泳检测到一条22kD大小的外源蛋白，与预测融合蛋白的分子量大小相应。CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2。