甜菜夜蛾羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及序列分析

羧酸酯酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一，与昆虫抗药性产生相关。利用粉纹夜蛾Trichoplusiani(Hübner)肠粘蛋白多克隆抗体免疫筛选甜菜夜蛾Spodopteraexigua(Hübner)中肠cDNA表达文库，得到编码羧酸酯酶的全长cDNA克隆。该cDNA克隆全长1812bp(GenBank登录号EF580101)，开放阅读框长1605bp，编码535个氨基酸。该蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186，Glu319和His443，3个N-联糖基化位点，具备羧酸酯酶的结构特征，属羧酸酯酶家族（EC:3.1.1.-）。将该基因与pQE30载体重组，经IPTG诱导，spot-blot鉴定，蛋白获得了表达；以α-醋酸萘酯为底物，检测表达的羧酸酯酶活性为1.3nmol/100μL酶液。