日本通草蛉cDNA文库构建及部分ESTs分析

本研究以日本通草蛉Chrysoperlanipponensis(Okamoto)为材料，采用Oligo(dT)引物定向克隆构建cDNA文库并进行EST序列测定，旨在以基因库的形式进行种质资源的保存，为其遗传改良奠定基础，并为探讨其分类地位提供分子依据。对该文库质量分析表明：库容量为1.0×106，重组率为80.0％，平均插入片段为512bp。测序后最终成功得到323条表达序列标签（expressedsequencetags，ESTs）序列，经Phrap程序聚类拼接后得到236条单基因簇（unigene），包括86个重叠群（congtigs）和150个单拷贝（singlets）。使用NCBI中的BlastN和BlastX程序对236条ESTs进行本地化搜索，BlastN的结果表明：180条ESTs（76.3%）没有注解，56条ESTs（23.7%）与GenBank上公布的序列有较高的同源性，其中一条序列被确定为该种的16SrRNA基因，利用MEGA软件构建了基于该16SrRNA序列草蛉科的系统发育树，结果显示通草蛉属Chrysoperla与叉草蛉属Dichochrysa、玛草蛉属Mallada、草蛉属Chrysopa的亲缘关系比较近，这与传统分类相吻合。BlastX的比对结果为197条ESTs（83.5%）有功能注解，39条ESTs（16.5%）无注解或score值小于100。使用GO(geneontology)数据库对236条ESTs序列进行功能注释，结果表明：142条ESTs（59.7％）有注解，并表达出40多种基因产物。