斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白基因PGRP-LC1的克隆及功能分析

天生免疫系统是昆虫抵御外界病原入侵的主要方式。目前研究发现,Imd信号通路与按蚊感染柏氏疟原虫Plasmodiumberghei的强度密切相关,而PGRP-LC1是Imd信号通路最上游的受体之一。为了研究斯氏按蚊Anophelesstephensi肽聚糖识别蛋白PGRP-LC1,采用RT-PCR并结合RACE技术克隆斯氏按蚊PGRP-LC1基因,通过序列比较分析,得到两条cDNA序列,其开放阅读框分别为1365bp和1290bp,3′非编码区为320bp,5′非编码区为240bp。将两条cDNA分别命名为AsPGRP-LC1a（GenBank注册号GU214232）和AsPGRP-LC1b（GenBank注册号GU214233）。AsPGRP-LC1a编码454个氨基酸,分子量约为49.07kDa；AsPGRP-LC1b编码429个氨基酸,分子量约为46.3kDa。AsPGRP-LC1b比AsPGRP-LC1a少一个长度为75bp的外显子,该外显子在冈比亚按蚊AnophelesgambiaePGRP-LC1基因的某些可变剪切形式中也有发现。分别将两个斯氏按蚊PGRP-LC1基因在冈比亚按蚊细胞系L3-5和斯氏按蚊细胞系MSQ43中过量表达,通过双荧光素酶检测系统检测抗菌肽的表达情况,结果显示克隆得到的PGRP-LC1基因在两种细胞系中均能够启动Imd信号通路,为进一步研究斯氏按蚊的Imd信号通路提供了依据。