家蚕吡哆醛激酶的融合表达与纯化

【目的】吡哆醛激酶（pyridoxalkinase,PLK,EC2.7.1.35）是维生素B6的关键代谢酶。本研究原核表达家蚕Bombyxmori重组PLK,为进一步开展家蚕PLK的催化作用机制和表达调控机制的研究奠定基础。【方法】构建家蚕PLK基因融合表达质粒,转化大肠杆菌Escherichiacoli诱导表达,经Ni2+亲和层析纯化后,对融合蛋白的催化活性进行分析。【结果】纯化后的家蚕重组PLK经SDS-PAGE鉴定为单一条带,比活力为1800U/mg,纯化倍数为40倍。在底物过量的条件下,该重组酶的体外最适反应温度是50℃;最适pH为5.5~6;Zn2+是酶促反应有效的激活剂。【结论】重组家蚕PLK与来源于家蚕组织的PLK具有相同的催化性质。