家蚕细胞周期蛋白基因BmCcnl1的克隆及表达分析

家蚕Bombyxmori由受精卵到完成胚胎发育孵化的过程中,细胞进行大量的分裂和分化,然而滞育性卵的胚胎细胞分化至G2期便停滞在此阶段。为了探索这一发育阶段细胞内的分子调控,本研究以人Homosapiens的细胞周期蛋白基因cyclinL1为模板,成功克隆了家蚕同源基因BmCcnl1（GenBank登录号:FJ889988）。BmCcnl1基因开放阅读框（openreadingframe,ORF）全长1254bp,编码417个氨基酸。利用Protean软件分析得出BmCcnl1蛋白预测分子量为49kDa,等电点为9.84。利用DNA重组技术构建了BmCcnl1基因的重组表达载体pET-21d-BmCcnl1,对其进行原核表达,其表达的蛋白以包涵体形式存在。利用RT-PCR技术分析了BmCcnl1基因在胚胎发育过程中的转录水平,BmCcnl1基因在非滞育性卵的胚胎发育阶段基本保持相对稳定的转录表达,而滞育性卵从蛾体产下经过72h后已经检测不到BmCcnl1基因的转录。结果提示,BmCcnl1基因与胚胎期滞育及非滞育性卵的发育调控相关。对该基因的克隆和表达分析为今后研究家蚕胚胎发育及细胞周期调控奠定了基础。