中华蜜蜂Orco嗅觉受体基因的克隆、表达及亚细胞定位

【目的】克隆鉴定中华蜜蜂Apisceranacerana的Orco嗅觉受体基因，并对其在工蜂触角上进行免疫荧光定位。【方法】利用RT-PCR技术克隆中华蜜蜂Orco基因，并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析，使用Real-timePCR技术鉴定其在中华蜜蜂不同发育时期及不同组织的表达谱；利用免疫荧光定位技术在中华蜜蜂工蜂触角中对Orco进行亚细胞定位。【结果】获得中华蜜蜂Orco基因的全长cDNA序列，命名为AcerOrco(GenBank登录号：JF968610.1)，其全长为1434bp，编码477个氨基酸，预测其含7个跨膜结构以及4个位于细胞膜外的亲水区。表达谱分析显示，AcerOrco在卵、幼虫和蛹期呈低丰度表达，1日龄及内勤蜂时期主要在触角和足中表达，且在1日龄的触角中表达量最高；采集蜂时期的触角、头(去除触角)、胸、腹和翅中均有较高丰度的表达。亚细胞定位结果显示，AcerOrco不仅在采集蜂触角鞭节上大量表达（尤其在触角鞭节第1亚节中表达量较高），而且常成对出现，并且发现AcerOrco可能主要在触角毛形感器的外部神经元(outerdendrite,OD)以及板形感器的树突神经元中表达。【结论】成功克隆了AcerOrco基因全长，获得了其表达谱，且将其定位于工蜂采集蜂的触角感器神经元上，最终推测AcerOrco与中蜂嗅觉发育和触角感器功能密切相关。