卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白（ZnT-7-like）的基因克隆、抗体制备及差异表达

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apismelliferacarnica锌转运蛋白7相似蛋白（zinctransporter7-like,ZnT-7-like）基因，制备ZnT-7-like多克隆抗体，了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RTPCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因，进行生物信息学分析，为避开跨膜结构的干扰，选择克隆其部分序列（273bp）作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，转入大肠杆菌EscherichiacoliBL21（DE3）中诱导表达获得融合蛋白，然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，分别用间接ELISA和Westernblot检测抗体的效价和特异性，最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Westernblot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因，大小为1065bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达；制备的多克隆抗体效价高达1∶64000，且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异，表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄（P<0.01），12日龄表达量最低，其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著（P<0.01）；ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因，制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体，并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。