小菜蛾U6snRNA基因的克隆及作为miRNA定量表达分析内参基因的评价

【目的】克隆小菜蛾Plutellaxylostella(L.)小分子非编码RNAU6的cDNA序列，并评价其是否适合作为定量检测小菜蛾microRNA(miRNA)表达量的内参基因。【方法】本研究采用RT-PCR克隆获得了小菜蛾4龄幼虫核小RNA(smallnuclearRNA,snRNA)U6的cDNA序列，并用定量PCR法检测了U6及8种miRNAs在小菜蛾不同发育阶段及不同杀虫药剂处理后的表达稳定性。【结果】小菜蛾U6的cDNA序列全长94bp，与其他昆虫U6的核苷酸序列一致性达98.9%。用geNorm和RefFinder软件分析荧光定量PCR结果表明，U6在小菜蛾卵、1-4龄幼虫、蛹和成虫7个不同发育阶段表达稳定；用马拉硫磷、毒死蜱、辛硫磷、灭多威、呋喃虫酰肼、高效氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺、溴虫腈和Bt9种不同作用机理的杀虫药剂处理3龄末幼虫48h，对U6的表达水平无显著影响。【结论】小菜蛾U6表达水平不受不同发育阶段和不同杀虫药剂处理的影响，符合作为内参基因的基本特点，可作为定量PCR法评价小菜蛾miRNA或其他非编码小分子RNA表达水平的内参基因。研究结果为小菜蛾miRNA表达水平的准确定量奠定了基础。