PEG介导的猴头菌遗传转化体系的建立

对猴头菌Hericiumerinaceus原生质体制备的各种因素进行比较研究，结果表明，猴头菌原生质体制备的最佳体系为：液体培养5d的猴头菌丝，以0.6mol/LKCl作为稳渗剂，加入含1.0%纤维素酶+1.0%蜗牛酶+1.0%溶壁酶的复合酶，在30℃酶解猴头菌丝3h时，原生质体得率达到3.0×106个/mL。潮霉素敏感性测试表明，猴头菌在PDSA固体培养基上的潮霉素最低筛选浓度为60μg/mL。采用PEG介导的原生质体法，将质粒pBgGI-hph（含有灵芝gpd1-Gl启动子和潮霉素抗性基因hph）转化猴头菌原生质体，经潮霉素初步筛选以及PCR鉴定，表明有4株猴头菌拟转化子的基因组扩增出hph基因；转化子经过多次转接后进行Southern杂交验证，结果表明4个转化子的基因组中均稳定整合了hph抗性基因。