小克银汉霉核糖体DNAPCR扩增产物的限制性片段长度多型性

应用一对寡核苷酸引物ITSl与ITS4对核DNAG+C百分数小于30％的小克银汉霉(Cunninghamella)属的核糖体DNA(rDNA)内转录间区(ITS)进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为：第一组4种1变种，小于764碱基对(bp)；第二组2种，765～824bp；第三组2种l变种，大于825bp。所研究的许多种中，特别是第三组，单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI，Tru9I，和HinfI4种限制性内切酶，对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性(RFLPs)的分析。在雅致小克银汉霉(Celegans)，巴西玉蕊小克银汉霉(C.bertholletiae)、和布拉氏霉(C.blakesleeana)各种的限制性酶切图谱，种内非常一致而种与种之间有差别。反之，在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同，在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下，只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR-RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义，并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。