立枯丝核菌（水稻纹枯病菌）G蛋白β亚基基因的克隆与特性分析

由立枯丝核菌Rhizoctoniasolani引起的水稻纹枯病（ricesheathblight）是水稻三大病害之一。G蛋白β亚基（G-proteinbeta-subunit）编码的蛋白作为重要的信号传导蛋白，在其致病分子机制中起着重要作用。为了解G蛋白β亚基基因的作用方式，本文根据同源物种G蛋白β亚基相关序列设计引物，通过PCR（polymerasechainreaction）和RT-PCR（reversetranscriptasePCR）技术，获得了以水稻为寄主的立枯丝核菌G蛋白β亚基（G-proteinbeta-subunitofriceRhizoctoniasolani，简写gbrrs1）的基因序列和开放阅读框ORF（openreadingframe）（GenBank登录号EU267677）。该基因全长1867bp，含有4个内含子和5个外显子，各内含子长度在54bp-65bp，且序列均符合5′-gt……ag-3′模式。开放阅读框1047bp，编码348aa，推测的蛋白质分子量为38.23kDa，等电点为6.54。该蛋白质具有2个alpha-helix和7个betasheet的二级结构，每个betasheet又包含4个beta-strand。gbrrs1在Ｎ端有2个alpha-helix，紧接着是由7个betasheet由无规则卷曲连接形成的桶形结构。GenBankBlast结果表明，gbrrs1与四种真菌生物G蛋白β亚基的氨基酸序列同源性较高，与Lentinulaedodes（AAT74567.1）、Coprinopsiscinerea（EAU92269）、Ustilagomaydis（AAN33051）和Filobasidiellaneoformans（AAD03596）的一致性分别达到了89%、88%、81%和81%。将gbrss1的开放阅读框克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-2中，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，获得了相应蛋白的表达。